1 原位在線檢測的技術
1.1 紅外光譜技術
很多物質對紅外線都有一定的吸收能力，且不同物質有不同特征吸收波段。紅外線被吸收的數量與吸收介質的濃度有關，當其通過待測介質后，其強度按指數規律減弱，符合朗伯-比爾定律。將光源的連續譜輻射全部投射到被測樣品上，根據樣品吸收輻射能的情況來判定被測成分的含量，目前在工業連續分析中應用較多。一直以來，原位過程監測中紅外光的傳遞和高性能紅外探頭的研制是難以解決的問題。近幾年通過研究取得了巨大的突破，如借助光路系統或光導纖維來傳遞紅外光，利用衰減全反射(ATR)原理，采用多次反射復合金剛石、鋯等材料制做的紅外探頭[1]，可適用于包括水溶液或其它強紅外吸收溶劑、固體粉末或紅外強吸收的樣品，紅外光進入樣品的光程恒定，樣品只要與全反射晶體材料緊密貼合即可。1992年，Kun Yu等[2]用在線ATR探頭跟蹤了蔗糖水解、大腸桿菌發酵等過程，從蔗糖水解過程的紅外譜圖的變化，可清楚地看到蔗糖吸收峰的吸光度下降，葡萄糖和果糖吸收峰的吸光度增加，亦能判斷完全水解所需要的時間，顯示出ATR/FTIR用于在線控制過程的優勢。
1.2 熒光檢測技術
熒光檢測可分為酶鍵合標記法、直接熒光測量法、熒光試劑測量法[3]。
酶鍵合標記法采用專一性強的鍵合劑，根據標記與非標記物在鍵合中心的競爭性反應，測定由鍵合劑置換下來的溶液含量，由此測知代謝中間物或基質的含量。當采用熒光標記物時，就可以用熒光分析法進行測定。此種測定法多用光導纖維探頭。二股光導纖維中的一股用來傳輸激發用的紫外光，另一股用來接收并傳輸測定室內(含有熒光標記物、待測物及被固定于光纖表面的鍵合劑)激發出的熒光，熒光經濾光片后由光敏器件接收，根據光強即可測知待測液中代謝物的濃度。
直接熒光測量法適用于測量自身能夠受激發發生熒光的物質，可不加試劑直接在激發光照射下進行比色，由于一定的熒光物質只能吸收一定頻率的光，而且能產生熒光的物質發出的熒光波長也不盡相同，因而只要控制激發光和熒光單色器的波長，便可得到好的選擇性結果，儀器安裝在培養液面下的反應器視鏡上，激發光源經濾色片照射到培養液上，待測物產生熒光，熒光強度由光電倍增管測量，反射的激發光及其它波長的熒光在通過濾色片時被濾去。
熒光試劑測量法適用于不能直接受激發出熒光，但具有與熒光素/熒光素酶產生光發射特征的物質。Lasko等[4]將 cDNA(控制熒光素酶合成)插入大腸桿菌的基因中，使其能合成熒光素酶。當往培養基中加入熒光素時，胞內ATP與熒光素在熒光素酶的催化下發生反應，并產生熒光。因熒光強度與ATP濃度有關，所以經驗檢測熒光可知ATP濃度。
1.3 離子敏場效應晶體管傳感技術
是利用胱用舾斜∧せ蟶?锘钚怨δ苣ご?娼鶚艄鉤傻男灤陀性窗氳繼寤??舾釁骷?Ｋ?肫脹ǖ某⌒Ь?騫艿牟煌??υ謨誶罷咼揮薪鶚粽さ緙??ぜ?櫓事懵痘蛟諂潯礱嬪細哺嵌圓煌?胱用舾械哪ぁ５苯?骷?糜詿?餿芤褐惺保?そ櫓?或離子敏感膜)直接與待測溶液接觸。傳感器對離子活度的響應可由柵介質與電解液界面處的電化學勢對閾電壓的影響來說明: VT=C S×lgai。式中VT為閾電壓，C為常數，S為離子敏場效應晶體管的靈敏度，ai為待測離子的活度。當參比電極及晶體管的其它參數恒定時，則閾值電壓與待測離子活度的對數呈線性關系。
2 非原位在線檢測技術
生化過程的測控通常要求不能污染被測系統，許多傳感技術由于不符合此條件或者其他方面的原因而不能用于原位監測，因此需要把發酵液樣品連續自動地從發酵罐中取出，然后對樣品進行自動分析。目前所有取樣技術中應用最廣泛的是流動注射分析技術(FlA)，因其消耗樣品量極少且可與多種檢測方法相結合運用[5]。有時為了選擇性地從物系內取樣分析，常在取樣品上設置連續過濾或滲析裝置，如硅管探頭允許分子在培養液中進行選擇性擴散，因而可以在反應器外分析物質的組成。取樣后對樣品進行分析的方法有很多，以下為一些比較新穎的檢測方法。
2.1 生物傳感器
生物傳感器利用微生物、酶等活性物質將待測物轉化為能被已有成熟的傳感器所感知的物質再進行檢測。常用的生物傳感器主要有酶電極和微生物電極。
酶電極是將酶與電化學傳感器相連結用來測量底物濃度的電極，是當待測物與酶膜發生作用時所產生的物質能被電化學傳感器檢知，從而可通過待測物與轉化物質之間的對應關系推定待測物質的濃度。葉幫策等[6]利用谷氨酸氧化酶共價偶聯于硅烷化鉑絲表面構建一種簡單的微酶電極，應用于流動注射分析系統來測量谷氨酸含量，測量范圍0~2×10-3mol/L，響應時間小于60s。另外，除了將酶與電化學傳感器相結合外，還可將其與其他的分析方法聯合進行檢測。如周宜開等[7]提出用固定化酶-化學發光分析法測定葡萄糖并在此基礎上構建一種新型葡萄糖傳感器(由固定化酶膜、光敏二極管及醋酸纖維濾膜構成)，檢測下限為0.5
ppm，可連續測定200個樣品。
微生物電極與酶電極原理基本相同，只不過將酶膜換成微生物即可。王永祥等[8]將大腸桿菌215用吸附法固定于醋酸纖維素膜上，與氧電極配合組成微生物電極，建立了對維生素Bl2的快速測定系統，測定濃度范圍5×10-5--2.5×10-6mg/ml,測定-個樣品所需時間為2h。
除了以上所提到的，近年來又經研究設計了一種壓電生物傳感器，是把生物敏感元件固定在石英林晶體上所組成的一種新型生物傳感器[9]。當一層外來物沉積于雙面鍍金AT切型石英晶體表面時，晶體的表面質量增加，從而引起諧振頻率的變化，它們之間的變化關系(壓電質量傳感的理論基礎)為Sauerbrey方程: ΔF/=-2.26×lO-6F2Δm/A。式中F為晶體天然諧振頻率(Hz)，Δm為沉積在晶體表面的質量變化(g)，ΔF為晶體頻率的變化(Hz)，A為參與晶振的面積(cm2)。壓電生物傳感技術得到迅速發展，應用廣泛。Su等在石英晶體表面固定DNA，用于檢測抗癌鉑藥物的含量，檢測限為l0-7mol/L[10]；Liu等使用串聯電極壓電晶體傳感器對L-谷氨酸進行檢測，檢測限為3.8×lO-5mol/L[11]。
2.2 核磁共振(NMR)
如同紫外線或紅外線的吸收會產生電子躍遷一樣，吸收適當頻率的電磁輻射線也能引起由強磁場產生的原子核磁級的躍遷。分子環境影響磁場中原子核的吸收，影響因素與分子結構有關。測量系統由一個高頻源、磁場及其它裝置成直角安裝的高頻檢測裝置組成。加入樣品后，接收器中出現信號。光譜由磁場或者高頻的掃描產生，光譜中各個峰面積與樣品的量成正比。用于生化過程檢測的質子核磁共振需碳-13核磁共振來說明，因其為生物結構的需要，而且碳-13核磁共振能提供分離得更好、更窄、更少的峰。NMR除與FIA技術結合應用以外，也可直接進行檢測。Sarazin等[12]采用NMR法對正丁醇與辛酸在角質化酶的催化下發生酯化反應的過程進行了檢測，由于使用一種內有NMR管的分光探頭，包括水在內的所有成份的濃度可被實時原位地檢測出。
2.3 質譜分析
根據待測物的質量與電荷的比例關系，質譜儀能提供試樣中不同分子量物質的濃度數據，并在磁場中將離子化了的氣體樣品進行分離。質譜儀可以通過對間歇發酵罐中易揮發成分或尾氣成分的分析間接得到培養液中化學組成變化的信息。當硅管探頭與質譜儀一起使用時，它能對多級發酵罐進行精確測量。Srinivasan等[5]研究了一種耐酒精基因工程酵母1400對葡萄糖進行發酵，并采用膜進樣質譜分析法(MIMS)結合FlA技術對發酵底物葡萄糖，主要產物乙醇及微量產物乳酸和甘油的濃度進行了在線監測，避免了由于底物葡萄糖濃度過高而阻礙乙醇生成的現象發生，從而提高了乙醇產量。Hansen[13]采用MIMS結合FIA技術對青霉素V發酵進行了在線監測，迅速簡便，結果準確。
2.4 生物分子交感分析(biomolecular interaction analysis，BlA)
BIA技術是基于一種表面等離子共振(SPR)的物理光學現象發展起來的新型生物傳感分析技術。當入射光以臨界角入射到兩種不同透明介質的界面時將產生全反射，且反射光強度在各個角度上都應相同，但若在介質表面鍍上一層金屬薄膜后，由于入射光可引起金屬中自由電子的共振，從而導致反射光在一定角度內大大減弱，其中使反射光完全消失的角度稱作共振角。共振角會隨金屬薄膜表面通過的液相的折射率的改變而改變，巳折射率的變化又可結合作金屬表面的生物大分子質量成正比。因此，BlA技術可以通過對反應全過程中各種分子反射光的吸收獲得初始數據，并經相關處理獲得結果。用SPR檢測器所得的信息可直接來自表面的樣品，也可間接來自能與樣品特異結合的相關試劑，且該相關試劑一方面可以放大樣品信號，另一方面還可以從粗樣品的嘈雜信號中獲得微量待測樣品的特異性信號。BlA技
術分析裝置一般由傳感片(實時信號傳導的載體)、微射流卡盤(液體傳送系統)、BIA操作輔助軟件三部分組成。
2.5 色譜分析技術
色譜分析技術從其出現到目前為止已發展得相當成熟，在生化過程離線檢測中應用廣泛。但近幾年來，隨著技術的發展，已逐漸將色譜法用于在線檢測，多與硅管探頭取樣裝置或FlA技術相結合使用。特別是高效液相色譜和氣相色譜將分離與連續檢測相結合，實現了對復雜體系中組分、價態和性質相近的元素或化合物的分析，比較廣泛地用于培養液中許多成分的測定[14]。
3 各檢測技術的應用前景分析
目前存在的各種在線檢測技術都具有自身的特點，在不同程度上反映了生物過程的變化信息。總的來說，能實現原位檢測的技術有更大的發展優勢，因非原位檢測需將培養液引流出反應器，從而存在一定時間滯后、過濾膜易被菌體堵塞等缺點。
紅外光譜技術的新型探頭能耐高溫滅菌，可承受高壓、強酸、強堿環境，實現原位監測，適用面廣。體系中存在氣泡、固體顆粒、懸浮物不干擾測定，且不破壞樣品。不影響正常培養過程。但當多組分共存時譜峰重疊現象普遍。目前化學計量學中對混合物多成分同時定量分析的迅速發展，重疊峰分解、多元非線性修正、多次疊加平均、因子分析、偏最小二乘法等對不同樣品和測量誤差的計算和修正等的發展，為避免紅外光譜這一缺陷提供了條件和可能性。
熒光分析法靈敏度很高，其中酶鍵合標記法所用的光纖探頭因未使用固定化生物活性物質，能承受高溫滅菌處理，若在同一傳感器內放入多種鍵合劑，可同時測定多個代謝物。直接熒光測量法簡便易行，不用另加試劑。但酶鍵合標記法所使用的電極易受其它代謝物干擾，專一性不如酶電極。同時培養液溫度、粘度、pH值以及光散射，熒光淬滅現象對熒光分析均有影響。在實際測試中，應根據不同的對象、不同的影響因素，分清主次，依具體情況采用合理的措施，以得到準確的結果。
離子敏場效應晶體管具有高輸入阻抗、低輸出阻抗、響應快、抗干擾及靈敏度高等優點，且這種傳感器體積很小，價格低廉，可望廣泛用于實際檢測中。核磁共振技術可對過程流體及其組成進行非接觸、不干擾的測量；BIA技術能快速自動化，且樣品也無需標記，均是有廣闊發展前景的技術。
生物傳感器靈敏、專一、微量、快速、準確，具有特異的生物分子識別功能均快速的物理化學方法相結合的特點，其中壓電技術儀器裝置簡單，無需標記物。但此類傳感器均不能
經受高溫滅菌，且微生物電極有易導致物質染菌的缺點。
質譜分析技術偏差小、響應快、精度高、維修問題少，但儀器設備昂貴，不討微處理機的問世有助于降低質譜儀的價格，也降低了調節它的復雜性。
色譜分析技術雖然發展成熟，測定精確，但其需復雜的預處理，測樣時間長；是一種理想的在線檢測技術。