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糞鏈球菌及檢驗(yàn)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-09-01
核心提示: 一、生物學(xué)性狀  根據(jù)最新分類原則,糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原,根據(jù)蘭氏(Lancefield)血清學(xué)分類,

一、生物學(xué)性狀

  根據(jù)最新分類原則,糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應(yīng)用C多糖抗原,根據(jù)蘭氏(Lancefield)血清學(xué)分類,可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌(S.faecalis)、屎鏈球菌(S.faecium)和堅(jiān)忍鏈球菌(S.durans),后者有牛鏈球菌(S.bovis)和馬腸鏈球菌(S.equinus)。

  糞鏈球菌菌形圓或橢圓,可順鏈的方向延長(zhǎng),直徑0.5-1.0微米,大多數(shù)成雙或短鏈狀排列,通常不運(yùn)動(dòng)。在豐富培養(yǎng)基上菌落大而光滑,直徑1-2mm,全緣,罕見色素。其營(yíng)養(yǎng)要求低,在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上也可生長(zhǎng)。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng),并能耐65℃ 30分鐘。它可利用精氨酸為能源,發(fā)酵山梨醇,不發(fā)酵阿拉伯糖。在簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不需葉酸。

   近年來(lái),DNA-DNA雜交結(jié)果顯示,腸球菌與鏈球菌屬同源程度低,故有學(xué)者建議另立腸球菌屬,與人類有關(guān)者為糞腸球菌(E.faecalis)和屎腸球菌(E.faecium)。

二、致病性

   糞鏈球菌引起的感染有尿路感染、化膿性腹部感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腹瀉發(fā)燒等。其中敗血癥最常繼發(fā)于生殖泌尿性感染,皮膚、膽道、腸道等感染也可作為原發(fā)病灶。從天然乳清培養(yǎng)物中分離的菌株,能產(chǎn)生一種細(xì)菌素,叫腸球菌素(Enterocin),對(duì)單增李斯特氏菌有殺滅作用。

三、流行病學(xué)

  糞鏈球菌為條件致病菌,它來(lái)源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便,偶爾出現(xiàn)于感染的尿道及急性心內(nèi)膜炎。它能夠通過(guò)食品對(duì)人類造成感染,因而常見于許多食品,如火腿腸、炸肉丸、布丁及經(jīng)過(guò)巴氏消毒的牛奶等,糞鏈球菌進(jìn)入食物鏈的主要原因是不衛(wèi)生的加工條件所致的,一般與直接的糞便感染無(wú)關(guān)。糞鏈球菌引起的感染大多是由于它的侵襲所造成,感染劑量較高,一般大于107個(gè)細(xì)菌。人、禽感染率最高,亦見于豬、牛、馬、山羊、綿羊及兔。

四、檢驗(yàn)與控制

1、檢驗(yàn):

  樣品制備 取25g或25mL樣品,放入225mL滅菌生理鹽水中,充分混勻,制成1:10樣品稀釋液。根據(jù)樣品的污染程度,制成適當(dāng)?shù)?0倍遞增稀釋液。

  a.多管法:

  用適當(dāng)?shù)南♂屢航臃N一套疊氮化鈉葡萄糖肉湯管。接種量為1mL或以下的,使用10mL單料管;接種量為10mL,使用10mL雙料管。35℃培養(yǎng)24-48h,并檢查記錄各管的混濁情況。用接種環(huán)將渾濁管中的培養(yǎng)物劃線于PSE平板上,倒置平板于36℃培養(yǎng)24h。平板上出現(xiàn)的帶棕色環(huán)的黑色菌落,確證為糞鏈球菌。根據(jù)接種的樣品量和確證為是糞鏈球菌的管數(shù),查MPN表,報(bào)告每克樣品中的糞鏈球菌MPN值。

  b.濾膜法:

  傾注融化的4-5mL的KF瓊脂于平板上,若平板表面有氣泡,可用火焰灼除。根據(jù)樣品的污染程度,使用樣液的量為100,10,1.0,0.1或0.01mL。使用滅菌濾膜過(guò)濾樣液,以能在濾膜上生長(zhǎng)出20-100個(gè)菌落為宜。將濾過(guò)樣液的濾膜緊貼在KF瓊脂培養(yǎng)基表面上,避免出現(xiàn)氣泡。倒置平板于36℃培養(yǎng)48h。糞鏈球菌在KF平板濾膜上形成暗紅色至粉紅色菌落。將典型菌落接種于腦心浸液斜面上,36℃培養(yǎng)48h。用其培養(yǎng)物做過(guò)氧化氫試驗(yàn),過(guò)氧化氫濃度為3%,陽(yáng)性反應(yīng)者為非糞鏈球菌群細(xì)菌。將陰性反應(yīng)者接種于腦心浸液肉湯,置45.5℃培養(yǎng)48h;同樣方式接種一管膽鹽肉湯,置36℃培養(yǎng)3天。在上述兩種情況下生長(zhǎng)者為糞鏈球菌。選擇生長(zhǎng)20-100個(gè)菌落的濾膜,根據(jù)所使用的樣品量,計(jì)算出樣品每克(毫升)中的糞鏈球菌數(shù)。

  c.平板計(jì)數(shù)法:

   取1mL適當(dāng)稀釋液加入培養(yǎng)皿內(nèi),傾入12-15mL的KF或PSE培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)動(dòng)平板充分混合。凝固后置36℃培養(yǎng),KF平板培養(yǎng)48h,PSE平板培養(yǎng)24h。糞鏈球菌在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌落,邊緣整齊,瓊脂表面下菌落呈橢圓或晶體狀;在PSE平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落。選擇有30-300個(gè)菌落的平板進(jìn)行記數(shù)。按糞鏈球菌數(shù)/g(mL)報(bào)告結(jié)果。

2、控制

  由于糞鏈球菌可通過(guò)食物對(duì)人類造成感染,所以應(yīng)從以下幾個(gè)方面加以控制:

  加強(qiáng)生產(chǎn)區(qū)域的衛(wèi)生管理,由于糞鏈球菌主要來(lái)源于人畜糞便,所以廁所要合理布局,避免糞便直接污染;生產(chǎn)人員要嚴(yán)格執(zhí)行個(gè)人衛(wèi)生制度。

  在加工過(guò)程中,嚴(yán)格注意每個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的控制,掌握好諸如溫度、水源衛(wèi)生等要素。

  對(duì)擺放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的食物,如熟食制品、牛奶或奶制品等,要徹底加熱再食用,春夏季尤其要注意。

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