资源新版在线天堂-桌下含校园污肉高h-坠落女教师-椎名由奈在线播放-六月色婷婷-六月丁香婷婷天天在线

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

玻片PCR

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01
在聚丙烯管中可以對多種含膜板材料進行PCR,而在顯微玻片上用組織細胞涂片或切片直接進行DNA擴增的方法就稱為玻片PCR(Slide-PCR)。
  先將細胞涂片或呈單層細胞,然后用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、無水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸餾水沖洗,干燥,直接使用或保存于-20℃備用。在玻片上劃20mm×28mm為免疫組化反應區。加入30μl PCR反應混合液,其中含10mmol/L Tris pH8.3,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,200μmol/l dNTPs,100nmol/L引物,0.01%(V/V)明膠,0.2% BSA, 2.5u/100μl Taq酶。然后蓋上22mm×40mm的蓋玻片,邊緣用石蠟油封好。把玻片放入PCR熱循環儀金屬塊上,使金屬塊與樣品呈最大程度接觸,同在聚丙烯管中一樣,進行30~40個循環。對于較短的擴增片段在后期循環中變性溫度可降低。反應后,將致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蠟油,但不取出蓋玻片,用一個尖鑷子輕輕拈起蓋玻片一角,在相對的一角中PCR反應混合液呈半月形液面,用移液器回收。一般可回收25μl混合液,將反應產物進行瓊脂糖電泳或用套式PCR引物按標準PCR進行重新擴增。片上擴增物可做原位雜交顯示。
  在Slide-PCR中,需0.1%~1%的BSA。加入BSA可以保證擴增結果,但效率不一定很高。明膠(至少0.0001%),對擴增1kb左右的靶DNA十分重要。但對小片段擴增結果影響不大。不同的樣品提取方法或固定法對Slide-PCR都可行。
  Silde-PCR的機理可能是在起始變性過程中一部分DNA從細胞中洗提出來,然后在細胞和玻片的水相中進行PCR。用地高辛標記的人全基因組DNA探針雜交表明在起始循環中DNA極微量,而30個循環后很豐富。常規細胞染色表明只有少量的形態改變。
  Silde-PCR對于玻片上的細胞樣品提供了一種較好的方法,而不必再把這些樣品從玻片上括下來,使操作簡便,污染減少。本方法對于原樣品量極微且需病史追蹤保存的(如子宮頸涂片或涂片)具有實用價值。
 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.469 second(s), 858 queries, Memory 2.69 M
主站蜘蛛池模板: 国产午夜精品视频在线播放| 熟女人妻AV五十路六十路| 2019精品国产品在线不卡| 青青青国产依人精品视频| 花蝴蝶免费观看影视| 超碰97人人做人人爱少妇| 伊人久久伊人| 网友自拍区视频精品| 免费乱理伦片在线观看夜| 国产亚洲精品AV片在线观看播放 | 久久久擼擼擼麻豆| 国产激情视频在线| gv肉片视频免费观看| 18和谐综合色区| 亚洲精品偷拍影视在线观看| 色-情-伦-理一区二区三区| 男女无遮挡吃奶gift动态图| 九九热这里只有国产精品| 国产免费人成在线视频视频| 第一会所欧美无码原创| 99在线观看精品| 最近中文字幕在线看免费完整版| 亚洲 欧美 国产 综合 在线| 日韩精品亚洲专区在线影院| 欧美成人无码A区在线观看免费| 久久精品国产欧美| 韩国伦理片2018在线播放免费观看 | caoporn超碰在线| 在线日韩欧美一区二区三区| 亚洲精品国产A久久久久久| 网友自拍成人在线视频| 色多多污污在线播放免费| 日本粉嫩学生毛绒绒| 男人J桶进男人屁股过程| 久久视频在线视频观看天天看视频| 国产一在线精品一区在线观看| 国产精品爽爽久久久久久竹菊| 广西美女色炮150p图| 光棍天堂在线a| 国产成人综合视频| 国产黄A片在线观看永久免费麻豆|