GB/T 16294-2010 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法

GB 15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準

一、配制藥品：生理鹽水（試管中+棉簽）或直接采購無菌涂抹棒、PCA培養(yǎng)基、VRBA培養(yǎng)基

二、培養(yǎng)基滅菌：

PCA------121℃，15分鐘；

VRBA-----無需滅菌，煮沸即可；

生理鹽水---121℃，15分鐘。

注：滅菌后的生理鹽水需冷卻徹底后才可以進行涂抹操作

三、涂抹操作：

a.取待測物（人員手部、操作案板、工器具表面等）涂抹面積為5*5cm²；

b.涂抹后將與手部接觸的棉簽棒的部分折掉；

c.檢樣作出2-3個稀釋度

1mL（原液）

→無菌平皿中（10^-1），2板菌落總數(shù)，2板大腸菌群=4板

→9ml滅菌生理鹽水中（10^-2），2板菌落總數(shù)，2板大腸菌群=4板

于10^-2試管中吸取1ml，加入9ml滅菌生理鹽水中（10^-3），

2板菌落總數(shù)，2板大腸菌群=4板

注：菌落倒入配置后滅菌的PCA，15-20mL，大腸倒入配制后滅菌的VRBA，15-20mL。

d.培養(yǎng)：待瓊脂凝固后放入培養(yǎng)箱中，平皿倒置（除霉菌PDA外，其余平皿均倒置培養(yǎng)），36±1℃，大腸培養(yǎng)24小時，菌落培養(yǎng)48小時。

e.查板計數(shù)：于N+1天，查大腸結果，N+2天，查菌落結果。

一、配制培養(yǎng)基：PCA、PDA；

二、倒板：按照計劃沉降點數(shù)，計算所需培養(yǎng)基及倒板的數(shù)量，PCA約20mL/板，PDA不得少于20mL/板（培養(yǎng)時間長，瓊脂少就干了）；

三、沉降：車間在30m²以上者，于東、西、南、北（距墻1m處）、中五點；小于30m²者，于一條對角線里、中、外三點，高度均在1.5m處采樣，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min（操作時，周圍不得有人員走動，防止結果不準）；

四、收板：將手部用75%酒精消毒后再收板，切忌觸碰到平板內(nèi)瓊脂

五、培養(yǎng)：PCA,36±1℃,培養(yǎng)48小時;PDA,28℃,培養(yǎng)5天；

六、查板計數(shù)：于N+2天，查菌落結果，N+5天，查霉菌結果。