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菌總計數容易會出現哪些問題呢？
1、在營養成分單一、保存條件苛刻的食品（水、水產品等）中，微生物復蘇、生長緩慢，培養48h計數時容易遺漏
2、一些食品處理后，仍存在類似菌落的顆粒狀雜質，很難判斷是菌落還是雜質
3、一些食品容易污染變形桿菌等運動性較強的蔓延菌，培養后無法計數。
關鍵是，能力驗證是考察實驗室檢驗能力的外部質量活動，組織方提供試驗樣本，在菌落總數項目上，一般會考慮增加上述難度。
防止蔓延的方法有哪些？
No.1 增加覆蓋一層瓊脂培養基
蔓延菌大多為需氧菌，覆蓋一層瓊脂的目的是隔絕空氣，降低需氧菌生長速度。
No.2 添加TTC
TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑），不僅可以使菌落產生紅色，便于辨識，也可部分地抑制大片蔓延菌落的形成。
No.3 陶瓦蓋代替平皿蓋
用陶瓦蓋代替平皿蓋，可有效去除培養基表面水分，阻止細菌移動，有效抑制蔓延。傾注培養基凝固后，用陶瓦蓋（干熱滅菌）代替平皿蓋，正置放入培養箱培養。
❓以上三種方法哪種最好呢？
👉真相大揭秘
方法：我們分別采用PCA直接傾注法、覆蓋一層培養基法、TTC法、用陶瓦蓋代替平皿蓋法對同一樣本進行菌落總數計數。其中，TTC培養基冷卻至56℃左右加0.5%的TTC溶液（1mL/100mL）。陶瓦蓋法平皿正置放入培養箱培養。
從6小時開始觀察菌落生長情況并計數，以后每隔12小時觀察1次。
結 果
PCA直接傾注法菌落生長相對較快，培養24h，菌落數已達到峰值，其他方法平板培養36h或48h后，達到峰值。
添加TTC的平板菌落生長相對比較緩慢，且培養到最后，菌落依然比較小，但總體檢出數值較高。其原因是TTC平板能將部分細小菌落，或生長于瓊脂內部、顏色與平板顏色相近，肉眼不易觀察的菌落計出。
有圖有真相
單因素方差分析，P＞0.05（95%置信度），四種試驗計數結果并無顯著差異。按照微生物能力驗證的數據統計分析原則，當Z≤2時方為滿意結果。因此雖然方法之間數據差異不大，但有必要提高檢驗技術，將結果控制在最準確的數值范圍之內，才能保證在能力驗證評價中取得滿意結果。
