金晶 殷愛琴 徐子茗
哈爾濱市南崗區疾病預防控制中心

本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，談一些觀點和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

1 培養基、抗血清和試劑對微生物檢驗質量的影響

1.1 購置培養基、抗血清和試劑時要求供應商提供產品質控證書，盡量選擇通過ISO9000認證的生產廠家。

使用前首先對外觀、批號、pH 值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估，用陽性和陰性對照菌株做質量控制實驗，要按照培養基和試劑標簽說明的貯藏條件保存，自配的染液每周必須作質控。如有條件可參照國際食品微生物與食品衛生委員會提供的關于培養基質控方法進行質控。

1.2 使用 培養基的使用應在有效期內，開封后的保存、制備過程中器皿管壁的潔凈度以及配制時的pH值要嚴格按規定控制，不同批號的培養基和試劑不要混合使用。目前市售的大多數為半成品培養基，無論是分裝后滅菌，還是無菌分裝，都應進行嚴格的無菌試驗，證明無菌生長后才能使用。從可靠來源獲得的診斷血清應注明收到的日期，如為凍干制品，還應注明配成水溶液的日期。使用前檢查外觀應清澈，如出現混濁表示己被雜菌污染。使用時應注意其有效期和滴度，使用前用標準菌株試驗其敏感性和特異性。

2 培養基的儲存

干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

3 培養基的性能測試

3.1 外觀控制制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發／脫水。

3.2 污染控制 從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。

3.3 性能測試

3.3.1 測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩定

特性并能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來自國際／國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。

3.3.2 定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋；測試平板和參照平板劃分為4個區域并標記；從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域；將稀釋液涂滿整個1/4區域，37℃培養18小時；對易計數的區域計數，按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數／參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.7，該類培養基應易于目標菌生長；選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.1。

3.3.3 半定量測試方法 改進的劃線法接種法平板分ABCD四區，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分，分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長，而非目標菌的生長應部分或完全被抑制， 目標菌的生長指數G大于6時，培養基可接受。

3．3．4 定性測試方法平板接種觀察法用接種環取測試菌培養物，在測試培養基表面劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養， 目標菌應呈現良好生長，并有典型的菌落外觀、大小和形態，非目標菌應是微弱生長或無生長。